单硝酸异山梨酯（ISMN）为二硝酸异山梨酯的主要生物活性代谢物,适用于冠心病心绞痛。

硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(25:75)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按单硝酸异山梨酯峰计算，应不低于3000。单硝酸异山梨酯峰与2-单硝酸异山梨酯峰的分离度应符合规定，与硝酸异山梨酯峰的分离度应不小于6.0。

测定法  取本品，加流动相制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取硝酸异山梨酯对照品与2-单硝酸异山梨酯对照品适量，加流动相分别制成每1ml中含5ug的溶液作为对照品溶液(1)、(2)。照含量测定项下的色谱条件，取对照品溶液(2)20ul注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%～25%；再取供试品溶液与对照品溶液(1)、(2)各20 ul分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

该条件下测得三批样品中硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯的结果见表1。

根据以上结果及《英国药典》2000年版和《欧洲药典》5.0版中的单硝酸异山梨酯中硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯的指标，结果规定：供试品溶液色谱图中如有硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯杂质峰，其各自的峰面积，均不得大于对照品溶液(1)、(2)的主峰面积1/2(0.5%)。  

1.zui小检出量和检出限度

取2-单硝酸异山梨酯对照品适量,用流动相制成浓度为每1ml含0.5mg的溶液,再逐级稀释，按上述色谱条件进样20ml。结果测得2-单硝酸异山梨酯zui小检测浓度为0.05mg/ml(2<S/N<3) ,检出限度为0.005%。

取硝酸异山梨酯对照品适量,用甲醇制成浓度为每1ml含0.5mg的溶液,再用流动相逐级稀释，按上述色谱条件进样20ml。结果测得硝酸异山梨酯zui小检测浓度为0.15mg/ml (2<S/N<3) ,检出限度为0.015%。

2.对照溶液的线性关系试验

2-单硝酸异山梨酯   精密称取2-单硝酸异山梨酯约12.5mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分别置100ml量瓶中，各加流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液各20ml，分别注入液相色谱仪，记录峰面积见表2。

以峰面积（A）对浓度（C）作线性回归，得线性回归曲线为：

A＝12627.19C+733.08，r＝0.9999。

试验结果表明，浓度在0.50～10.08μg/ml，其峰面积与浓度呈良好的线性关系。

硝酸异山梨酯    精密称取硝酸异山梨酯约12.5mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分别置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液各20ml，分别注入液相色谱仪，结果见表3。

以峰面积（A）对浓度（C）作线性回归，得线性回归曲线为：

A＝19806.47C+1060.90，r＝0.9999。

试验结果表明，浓度在0.51～10.22μg/ml，其峰面积与浓度呈良好的线性关系

3.精密度试验

分别取上述的对照溶液20ml依次注入液相色谱仪，记录测得的峰面积，重复进样6次，结果见表4、表5。

试验结果表明, 精密度良好。

4.溶液的稳定性测定

制备2-单硝酸异山梨酯对照液、硝酸异山梨酯对照液和供试品溶液，分别于0、1、2、4、8小时精密量取20ml依次注入液相色谱仪，记录色谱图,用外标法计算杂质的含量，结果见表6。

试验结果表明，硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯检查测定溶液在8小时内基本稳定。

5.回收率试验

精密称取2-单硝酸异山梨酯约12.5mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀作为对照溶液(1)；精密称取硝酸异山梨酯约12.5mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀作为对照溶液(2)。精称单硝酸异山梨酯样品约10mg于10ml量瓶中(9份)，分别制成含两对照液0.4%、0.5%、0.6%的溶液各三份，分别精密量取上述溶液20μl依次注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算2-单硝酸异山梨酯与硝酸异山梨酯的加入量。测定结果见表7、表8。

2-单硝酸异山梨酯的平均回收率为100.3%；RSD为0.39%

硝酸异山梨酯的平均回收率为100.7%；RSD为1.02%

 结论：由以上结果知，本品中硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯测定方法准确度

较高,验证指标良好,按上述检测方法订入质量标准中。