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单硝酸异山梨酯(ISMN)的研究
发布时间:2013-12-19   点击次数:773次

单硝酸异山梨酯(ISMN)为二硝酸异山梨酯的主要生物活性代谢物,适用于冠心病心绞痛。

硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(25:75)为流动相;检测波长为210nm。理论板数按单硝酸异山梨酯峰计算,应不低于3000。单硝酸异山梨酯峰与2-单硝酸异山梨酯峰的分离度应符合规定,与硝酸异山梨酯峰的分离度应不小于6.0。

测定法  取本品,加流动相制成每1ml中含1mg的溶液,作为供试品溶液;另取硝酸异山梨酯对照品与2-单硝酸异山梨酯对照品适量,加流动相分别制成每1ml中含5ug的溶液作为对照品溶液(1)、(2)。照含量测定项下的色谱条件,取对照品溶液(2)20ul注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%~25%;再取供试品溶液与对照品溶液(1)、(2)各20 ul分别注入液相色谱仪,记录色谱图。

该条件下测得三批样品中硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯的结果见表1。

根据以上结果及《英国药典》2000年版和《欧洲药典》5.0版中的单硝酸异山梨酯中硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯的指标,结果规定:供试品溶液色谱图中如有硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯杂质峰,其各自的峰面积,均不得大于对照品溶液(1)、(2)的主峰面积1/2(0.5%)。  

1.zui小检出量和检出限度

取2-单硝酸异山梨酯对照品适量,用流动相制成浓度为每1ml含0.5mg的溶液,再逐级稀释,按上述色谱条件进样20ml。结果测得2-单硝酸异山梨酯zui小检测浓度为0.05mg/ml(2<S/N<3) ,检出限度为0.005%。

取硝酸异山梨酯对照品适量,用甲醇制成浓度为每1ml含0.5mg的溶液,再用流动相逐级稀释,按上述色谱条件进样20ml。结果测得硝酸异山梨酯zui小检测浓度为0.15mg/ml (2<S/N<3) ,检出限度为0.015%。

2.对照溶液的线性关系试验

2-单硝酸异山梨酯   精密称取2-单硝酸异山梨酯约12.5mg,置25ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml,分别置100ml量瓶中,各加流动相稀释至刻度,摇匀。精密量取上述溶液各20ml,分别注入液相色谱仪,记录峰面积见表2。

以峰面积(A)对浓度(C)作线性回归,得线性回归曲线为:

A=12627.19C+733.08,r=0.9999。

试验结果表明,浓度在0.50~10.08μg/ml,其峰面积与浓度呈良好的线性关系。

硝酸异山梨酯    精密称取硝酸异山梨酯约12.5mg,置25ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml,分别置100ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。精密量取上述溶液各20ml,分别注入液相色谱仪,结果见表3。

以峰面积(A)对浓度(C)作线性回归,得线性回归曲线为:

A=19806.47C+1060.90,r=0.9999。

试验结果表明,浓度在0.51~10.22μg/ml,其峰面积与浓度呈良好的线性关系

3.精密度试验

分别取上述的对照溶液20ml依次注入液相色谱仪,记录测得的峰面积,重复进样6次,结果见表4、表5。

试验结果表明, 精密度良好。

4.溶液的稳定性测定

制备2-单硝酸异山梨酯对照液、硝酸异山梨酯对照液和供试品溶液,分别于0、1、2、4、8小时精密量取20ml依次注入液相色谱仪,记录色谱图,用外标法计算杂质的含量,结果见表6。

试验结果表明,硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯检查测定溶液在8小时内基本稳定。

5.回收率试验

精密称取2-单硝酸异山梨酯约12.5mg,置25ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1.0ml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀作为对照溶液(1);精密称取硝酸异山梨酯约12.5mg,置25ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1.0ml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀作为对照溶液(2)。精称单硝酸异山梨酯样品约10mg于10ml量瓶中(9份),分别制成含两对照液0.4%、0.5%、0.6%的溶液各三份,分别精密量取上述溶液20μl依次注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算2-单硝酸异山梨酯与硝酸异山梨酯的加入量。测定结果见表7、表8。

2-单硝酸异山梨酯的平均回收率为100.3%;RSD为0.39%

硝酸异山梨酯的平均回收率为100.7%;RSD为1.02%

 结论:由以上结果知,本品中硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯测定方法准确度

较高,验证指标良好,按上述检测方法订入质量标准中。

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